[求救] DNA/RNA定量原理?

看板Biotech (生命科學)作者crazyrange (熱血羽球)時間18年前 (2008/04/25 16:42)推噓3(3推 0噓 3→)

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為了計算這個東西我查了一下網路 O.D = 濃度 x 消光係數(即DNA 20 ul/ug; RNA 25ul/ug) 換算回來就是濃度= O.D x factor(即DNA 50 ng/ul;RNA 40 ng/ul) 以純的DNA來說用50 ng/ul純DNA可以測到A260為1.0 以純的RNA來說用40 ng/ul純RNA可以測到A260為1.0 我的問題出現了因為RNA/DNA都是用A260測那麼以純的DNA測DNA A260可以得到1.0 那麼以純的DNA測RNA A260的話同樣也可以得到1.0 (因為她們都是用A260去測的) 可是明明就沒有RNA 可是按照公式換算 1.0 x 40 ng/ul 還是可以計算的出RNA 這樣不就變的很奇怪一般我們萃取的RNA裡面多少都會含有DNA 在那非純的情況下(有RNA和DNA) 那麼A260所測得的吸光值是濃度(DNA)x消光係數+濃度(RNA)x消光係數? 此外吸光值是藉由鹼基會吸收紫外光來測量萃取RNA後為了排除DNA的汙染會使用DNase來破壞DNA成為oligo- or mono-nucleotide 可是在測量吸光值的時候necleotide還在一樣會被納入吸光值裡面這樣測起來濃度不就超不準後我來想想DNase的目的只是避免RT的時候DNA也會被RT到所以DNase只能解決這個問題,但濃度的問題還是在? 怎麼會這樣? 因為我是自己查資料來學這部份的可能很多人會是學長姐教導的所以在學的時候,可能就不會去想這問題自然就接受了可能是我比較刁鑽吧. 不過,我想這應該算是個問題吧煩請各位有經驗的大大解解疑惑感恩!感恩! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.120.7.114