[求救] 蛋白質透析完沉澱了......

看板Biotech (生命科學)作者 (薩加利亞)時間18年前 (2008/04/29 16:47), 編輯推噓5(502)
留言7則, 5人參與, 最新討論串1/1
小弟的最近再做酵素的功能分析 打算用低鹽濃度做測試(之前是用高鹽) 所以我先用透析膜將蛋白質由原先的buffer Tris-20mM NaCl-300mM imidazole-200mM 透析到 Tris-20mM NaCl-20mM 然後 蛋白質就全部沉澱了 我試著離心以後取上清液來測量濃度 只剩下150 ng/ul左右 之後 我試著兩次透析 先透析到中鹽 150mM 再到低鹽 20mM 結果還是一樣 請問 各位前輩有什麼方法可以幫我解決這個問題呢? 感激不盡 謝謝 -- 滾! \( ̄□ ̄")/  (\ ̄□)  ( \ ̄)  \( )/  ( ̄"/)  (□ ̄"/) \( ̄□ ̄")/ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.98.221

04/29 22:52, , 1F
有試過在透析中加beta-mercaptoethanol or DTT嗎?
04/29 22:52, 1F

04/30 01:33, , 2F
很好奇 為啥要加?打斷雙硫鍵?
04/30 01:33, 2F

04/30 12:47, , 3F
使用高濃度時可以打斷雙硫鍵,相反低濃度時可以穩定蛋白
04/30 12:47, 3F

05/01 00:54, , 4F
imidazole濃度不能一次降到0,要慢慢降..200/100/50/0
05/01 00:54, 4F

05/01 00:55, , 5F
這樣應該就能解決你沉澱的問題
05/01 00:55, 5F

05/01 19:17, , 6F
恩~謝謝各位 那我試試看了
05/01 19:17, 6F

05/10 03:20, , 7F
推慢慢降喔~ 時間間隔最好超過兩個小時
05/10 03:20, 7F
文章代碼(AID): #185k2k_Y (Biotech)
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