[求救] 濃縮管吃掉蛋白質 ?!
板上各位先進們好
有個關於濃縮管 amicon (10 kD cutoff) 的問題
雖然知道在濃縮的過程中 蛋白質會有一定程度的損失
但感覺在下的情況有點誇張 麻煩各位指正一下
原液 : 20 mM HEPES, 0.5 M NaCl,
250 mM imidazole (Ni column 純化), pH 7.4
約放入 8 mL 進濃縮管 (CBG 染色, OD 595 ~ 1 左右)
3000 rpm, 30 mins, 4 度 C 濃縮成約 1 mL
再測濃縮管上層蛋白質的濃度 "仍跟原液一樣"
測濃縮管下層 則無蛋白質存在 (membrane 應該沒破)
將上層置換 buffer : 20 mM HEPES, 0.5 M KCl, pH 7.4
加到 15 mL 再濃縮一次至 1 mL
結果這次上層蛋白質所剩無幾.....下層也是測不到蛋白質
請問在下的步驟 或是 buffer system 有互衝的問題嗎 ?
"理論上" 來說 在下的蛋白質濃度 應為原液的 8X
鹽濃度應為 1/15 對嗎 ?
感謝各位指教 !
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05/19 10:54, , 1F
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05/19 13:35, , 2F
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