[閒聊] 有辦法代替trypsin inhibitor的步驟嗎？

看板Biotech (生命科學)作者LIAR (墮天使)時間18年前 (2008/05/31 00:31)推噓4(4推 0噓 7→)

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我是wistar 7-day的小腦做神經培養，我們的protocol是這樣的把分離的小腦剪碎到1mm左右，從dish移入50ml 離心管(此時體積8ml) 加入3.5% trypsin 1ml │25 min ↓ 加入3.5% trypsin inhibitor & DNAase 100ul 20 min │ ↓ 離1500 rpm去上清液，重加kerb solution 10ml沖散過40 um filter 我們trypsin inhibitor剛用完，我準備要訂才發現5g大概要2萬多台幣，3.5%來用 1ml 就要$140，FBS $8000/500ml 也沒那麼貴。時驗室其他小組說可以用血清或medium消減trypsin活性，但大家cell不同，trypsin 濃度也不一樣（我們的最濃），所以我想請問我們應該這麼做比較好，譬如說 1.trypsin 25min後直接離心重加kerb過40um，但我不曉得這時細胞受不受得了離心和過濾的壓力。 2.medium直接同體積取代trypsin inhibitor，但濃度不曉得夠不夠。 3.FBS直接同體積取代trypsin inhibitor，問題同上。或是從其他步驟著手，譬如trypsin降低之類的，可以請各位給我一點建議嗎？ -- 太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.40.98