[求救] 3'-RACE 一直smear....><

看板Biotech (生命科學)作者 (丹丹)時間18年前 (2008/06/08 21:40), 編輯推噓2(203)
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如標題所示.... 3'-RACE 無論是重作3'-cDNA 或是重新設計primer 就是一直呈現smear狀態.... 我已經把extension time加到4分鐘... Tm目前是58度C (沒辦法...我已經設計到極限了..天生序列的問題) anealing temp 我從55降到50 仍然都一樣... 拜託...請有經驗的人幫幫我吧>< 先前po過文了... 不見回應..~><~ 我真的已經很認真做功課 primer 比對過了 也重新設計另外三組primer PCR條件也慢慢修正 cDNA也已經重做三次 quality也都ok~(跑過膠片..) 但 結果都是一樣!! 拜託 大家 幫幫我吧><(跪求) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.192.30

06/12 21:33, , 1F
我現在也在做3'RACE 但我的問題跟你不一樣 你可以參考一下
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06/12 21:36, , 2F
這篇paper 全名我忘了 Reduce extension temperature...
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06/12 21:39, , 3F
他有一張圖顯示 降低extension temperature至60度 效果明
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顯改善 希望有幫助
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06/13 10:07, , 5F
非常感謝您~~我會趕快下來看!!!:)
06/13 10:07, 5F
文章代碼(AID): #18I-55_f (Biotech)
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