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[求救] GST pull-down agarose

看板Biotech (生命科學)作者 (樂天 歡樂每一天)時間18年前 (2008/06/08 01:52), 編輯推噓2(2推 0噓 3→)
留言5則, 2人參與, 最新討論串1/1
目前在作fusion protein 的蛋白和蛋白的交互作用 但是GST 和有fusion 蛋白的GST 都會抓到預期的蛋白 只是GST only的會比較少 學長建議也許可以在作fusion protein和 GST agarose 4B 作用完後用 BSA 或牛奶 去blocking 不過學長也沒做類似的實驗 請問學長這樣可行嗎 我問過其他作過此實驗的人 他們說並不需要這步 或者有啥其他的方法可以讓GST only的不抓到預期的蛋白 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.93.225 ※ 編輯: kevinwyc 來自: 163.25.93.225 (06/08 01:52)
推
06/08 02:10, , 1F
應該是作用前做blocking吧，另外用高鹽buffer去洗應該有用
06/08 02:10, 1F
推
06/08 02:14, , 2F
除非你的用量已經很少了,不然4B別太多,GSTs與target都先改
06/08 02:14, 2F
→
06/08 02:15, , 3F
成1/2甚至1/4的用量,會比BSA有效(幾乎沒聽過這裡用milk的)
06/08 02:15, 3F
→
06/08 02:16, , 4F
另外有人是step1用GST lysate而非purified與4B作用,而step2
06/08 02:16, 4F
→
06/08 02:17, , 5F
才加purified target,這樣的話lysate也具有blocking效果
06/08 02:17, 5F
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