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[求救] 關於 Western blot

看板Biotech (生命科學)作者 (new life)時間18年前 (2008/06/20 13:41), 編輯推噓4(4推 0噓 6→)
留言10則, 5人參與, 最新討論串1/1
想請教一下大家 當在 1st Ab 非常弱的情況下做 western blot 每個 well 要 load 多少濃度的 protein 比較適當? 依照我們的 protocol 是 25 ug/well 可是上次完全沒有東西染出來 所以這次想用 100 ug/well or higher, 不知道可不可行 此外, 1st Ab 上次是用 1:1500 稀釋 這次想試 1:500 or 1:100, 想請問這樣可行嗎? 目前想到只有這兩種方法, 還有其他建議嗎? 感謝大家的回答 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 71.12.189.97
推
06/20 22:04, , 1F
你說的方法都ok,不過建議一次改一種條件,以免之後不知道哪個
06/20 22:04, 1F
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06/20 22:04, , 2F
條件最重要,另外就是可以2抗在4度C作用over night,我有一些不
06/20 22:04, 2F
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06/20 22:05, , 3F
易偵測的的蛋白質用這種方法就可以偵測到了,祝好運^^
06/20 22:05, 3F
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06/21 14:59, , 4F
請問通常block、1st、2nd，哪種4度C作用over night比較好？
06/21 14:59, 4F
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06/21 18:31, , 5F
你綜覽各家廠商protocal看看,應該都以1st為o/n最佳選擇建議
06/21 18:31, 5F
推
06/21 21:12, , 6F
我通常也都是1抗o/n,非不得已時才會1抗2抗都o/n
06/21 21:12, 6F
推
06/22 10:47, , 7F
還有wash的時候Tween 20的濃度可調低, 只是這樣也會比較髒
06/22 10:47, 7F
推
06/23 02:52, , 8F
1抗o/n效果較佳，也有oven37度1h（但就只能用一次，比較傷
06/23 02:52, 8F
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06/23 02:53, , 9F
的方法，block n/o我覺得沒差，但是2抗個人以為不宜n/o，
06/23 02:53, 9F
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06/23 02:53, , 10F
因為會使背景值過高，容易出現黑團，反而模糊band
06/23 02:53, 10F
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