有關histone protein的蛋白質電泳

看板Biotech (生命科學)作者 (天涯宦遊人~)時間18年前 (2008/06/22 10:57), 編輯推噓1(103)
留言4則, 2人參與, 最新討論串1/1
我抽取組蛋的的protocol是以下這個 (acid extraction) http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/Histone%20extraction%20protocol.pdf 但是物種是阿拉伯芥(植物) 但最後去除上清液後是用8M urea回溶, 溶液會呈白色混濁狀 在跑SDS-PAGE後染Commassie blue 不會看到很多條的Protein band 只有一條很明顯的 大約55KD的band (loading protein:10ug ) 以這樣的蛋泳模式接著進行western blot, 1抗是H2B (大小約17左右) 會壓到55KD的訊號 O_O 履試不爽 請問在我的做法中有什麼地方出錯 或少做, 導致這樣的結果嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.52.104

06/22 14:14, , 1F
幾個問題,1去除上清液?加acid後離心的上清液? 2urea回溶該
06/22 14:14, 1F

06/22 14:17, , 2F
沒有? 3western沒有17k的H2B?
06/22 14:17, 2F

06/22 14:19, , 3F
如果把上清液去除,那8M urea是要回溶pellet?
06/22 14:19, 3F

06/22 14:19, , 4F
加acid後, 離心的上清液去除, pellet以8M urea回溶
06/22 14:19, 4F
文章代碼(AID): #18NR-Cko (Biotech)
文章代碼(AID): #18NR-Cko (Biotech)