[求救] 我的PCR跑不出東西~ 救命阿~~

看板Biotech (生命科學)作者 (yabia)時間18年前 (2008/06/27 13:23), 編輯推噓8(808)
留言16則, 9人參與, 最新討論串1/1
我的問題和精華區裡面的一樣,但是精華區中的文章沒有確切的解答出來... 所以只好跳出來向大家求救同樣問題... 是這樣的.... 我在三個星期前,跑了一批PCR兩次,都有我要的結果出來. 上星期,因為實驗需要,我又再跑:同樣sample,同樣藥劑,同樣黏合溫度,同 樣primer....等,完全一樣的條件,卻跑出空空如也的照膠照片<=除了Marker 跑得真漂亮.... Q.Q well,我以為我不小心手殘,隔天比較小心地重做一次,同樣空. 我開始檢討是不是因為primer或是sample壞掉,我有拿去做電泳看膠片,是OK的. 我也有考慮過精華區的,啥ddH2O或是黏合時間的問題...這星期都把時間花在測 這個,不過都沒跑出任何東西,只有Marker跑的很漂亮.... Q.Q 我開始在考慮是不是我的藥劑的問題?? <=雖然我不覺得經過兩個星期後就壞光 光了.(冰在-20度冰箱中都沒碰)打算明天測試看看. 請問大家有沒有啥意見可以幫忙給我參考一下?? 感激不盡!! 如果我測試成功, 答對的人我請吃飯!! Q.Q <=光弄個PCR都弄不出來,真的超丟臉的... >_<~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.122.152.241

06/27 13:53, , 1F
有換機器跑過嗎?
06/27 13:53, 1F

06/27 15:55, , 2F
Taq是同一批嗎?這些藥劑只有你在使用嗎?問一下吧...
06/27 15:55, 2F

06/27 15:56, , 3F
實驗室常發生的問題是別人的保存習慣不好,問一下吧...
06/27 15:56, 3F

06/27 16:28, , 4F
真的要找的話,做個control吧,別忘了正統PCR是要做control的.
06/27 16:28, 4F

06/27 17:56, , 5F
有換機器,藥劑除Taq,DMSO,其他都只我一個人在用.
06/27 17:56, 5F

06/27 17:57, , 6F
完全沒做control,請問要拿啥來做control呢?有商品? @_@y
06/27 17:57, 6F

06/27 18:20, , 7F
可能是taq enzyme...建議應該是要你做positive control
06/27 18:20, 7F

06/27 18:52, , 8F
實驗室學弟妹超常問的問題:學長學長,怎麼沒有band??
06/27 18:52, 8F

06/27 18:54, , 9F
通常我都建議,就是在簡單的實驗也必須+control
06/27 18:54, 9F

06/27 18:55, , 10F
重點是,若干時間之後,原班人馬又一定會問,學長學長
06/27 18:55, 10F

06/27 18:56, , 11F
怎麼沒...話還沒說完,我已經翻桌了
06/27 18:56, 11F

06/27 19:34, , 12F
下次記得拿到試劑就先分裝,遇到沒出來,舊的就全丟了.換新
06/27 19:34, 12F

06/27 19:47, , 13F
機器也換啦?同樣 一台的再現性呢?
06/27 19:47, 13F

06/28 16:08, , 14F
dNTP壞掉? dNTP也不能離冰太久~我這聽說前輩有人dNTP壞掉所以P
06/28 16:08, 14F

06/28 16:09, , 15F
不出來..加完後也最好先放冰上~當然primer也一樣...
06/28 16:09, 15F

06/28 17:24, , 16F
你的primer是哪一家的?? 之前有人跑出來過嗎??
06/28 17:24, 16F
文章代碼(AID): #18P7bTyt (Biotech)
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