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[求救]cloning的sequence出錯了

看板Biotech (生命科學)作者 (doskoi)時間17年前 (2008/06/29 02:37), 編輯推噓5(5推 0噓 2→)
留言7則, 5人參與, 最新討論串1/1
最近在做cloning 有在primer上加上restriction site 做完pcr後把product插入vector 送入E.coli後抽plasmid去做定序 晴天霹靂阿~~~ sequence的正確率居然只有9x% 我是用taq去做PCR的 本來想說換成Pfu正確率應該會高一點 但又怕pfu的proofresding功能把一開始沒配對的restriction site sequence給修掉 請問一下這種情形有什麼比較好的解決方法嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.89.188
推
06/29 09:53, , 1F
用Pfu不會發生你擔心的問題,因為你的primer長,修不到
06/29 09:53, 1F
推
06/29 12:22, , 2F
可以看看定序完的訊號是否可信....
06/29 12:22, 2F
→
06/29 16:56, , 3F
你的意思是定序不一定正確嗎? 要怎麼看阿?
06/29 16:56, 3F
推
06/29 19:37, , 4F
應該可以要一張訂序的intensity 就訂出鹼基的強度
06/29 19:37, 4F
→
06/29 19:37, , 5F
越後面會越來越亂
06/29 19:37, 5F
推
06/29 19:41, , 6F
看長度吧ˊˇˋ 每家公司不同 EX:明X 老闆只看800前
06/29 19:41, 6F
推
06/29 22:52, , 7F
liuse大講的沒錯，看定序的訊號圖
06/29 22:52, 7F
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