[求救] SDS-PAGE的LANE會膨脹,把marker擠扁

看板Biotech (生命科學)作者 (觀察者)時間17年前 (2008/07/15 00:07), 編輯推噓3(306)
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http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/gelgoofs/bizarre.html#3 有點像右邊那種,以marker來說,越下面就越瘦,簡直像被排擠一樣。 (不管放旁邊或中間都一樣) 當時老師檢查我的配方,說我sample buffer的TRIS太濃(1X大概250mM), 如果已經製好sample的話,則考慮把marker和loading buffer混合看能不能好一點, 不過我那批sample很快就用完了,也不想冒險亂動marker,這次重配lysis和loading 兩種buffer,lysis只有10mM~30mM,3X loading buffer則是90mM和180mM。 我做排列組合去試,可是即使是最低的lysis(10mM)+3X loading(90mM)=36.6mM(1X) sample lanes還是明顯膨脹,雖然marker(62.5mM)沒被擠那麼扁了, 還是沒法像一般常見的data一樣直,transfer後如果不染膜,也容易剪到別條lane。 既然marker的tris有62.5mM,為什麼還會被我的sample擠出去呢? -- 太初有道,道與耶和華同在,道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。 萬物乃藉祂所造,凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭, 這生命就是人的光。光照在黑暗裡,黑暗卻不接受光。 吾輩乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦誘惑,回歸黑暗。 我不斷地徘徊於光明與黑暗之間,從被造之日至今,又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.40.98

07/15 00:15, , 1F
你把marker補你的1X sample buffer到跟其他sample一樣體積
07/15 00:15, 1F

07/15 00:15, , 2F
情況會改善很多吧
07/15 00:15, 2F

07/15 00:22, , 3F
請問marker和sample buffer混合不會有事嗎?
07/15 00:22, 3F

07/15 00:23, , 4F
譬如說band的位置改變之類的(by SDS or 2-ME)
07/15 00:23, 4F

07/15 00:34, , 5F
有的marker也是要加sample buffer去煮才能load...
07/15 00:34, 5F

07/15 00:56, , 6F
我用的是SM0671 http://0rz.tw/f14nS 至少不能煮...
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07/15 21:49, , 7F
他們家的maker超好用 3ul就可以看到了 不用煮
07/15 21:49, 7F

07/15 21:50, , 8F
我覺得是你膠沒泡好耶??
07/15 21:50, 8F

07/15 21:51, , 9F
別人跑會這樣嗎?? 不然可能是電泳槽或電壓不穩??
07/15 21:51, 9F
文章代碼(AID): #18Utc-36 (Biotech)
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