[求救] primer anneal
需要做一個cloning，使用2個primer 去anneal出我要的基因(這個
基因很短)，為了方便ligation，2個primer各有一個cuting site。
primer A: Tm:73.5℃
5' 3'
TTAAGCTTAGAAGGAGAACCATGGAAGCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCCTCCTGCT
------ ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
HindIII overlap
primer B: Tm:75.8℃
5' 3'
AAGGATCCTCTCCGGTGGTATCTGGGAGCCAGAGTAGCAGGAGGAAGAGAAGCTG
------ ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
BamHI overlap
overlap:是我要anneal出來的基因片段
請問我要怎麼樣才能成功的anneal這兩個primer？
並且可以在agarose gel看到清楚的band呢？
目前都只能看到一團糊糊的，不像正常的DNA電泳跑出來的清晰的band
試過1.68~55℃的anneal溫度
2.加過2%~10%的DMSO
3.直接拿糊糊的那團去做後續的步驟，可是長不出colony @@~
我想要詳細的protocol，謝謝。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 134.208.24.2
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