[求救] 用Turbo pfu PCR 做不出來...
各位前輩好
我是大三的進實驗室的研究生
這幾天以來我用Turbo pfu polymerase 做pcr卻一直沒有東西
我需要的DNA片段是1.2Kb的大小而且跑完電泳照膠確認後是完全沒東西
只有一堆的primer在下方而已...
我爲了確認是不是primer或是DNA template的問題
所以用另外一個polymerase (go-taq)來做而可以p出一段1.2kb的DNA
其他像是dNTP的濃度或是extention的時間等等的問題也都按照建議的條件去做
我的pcr condition 是:
preheat 94度 2min template 0.5 ul
denaturation 94度 40s ← primer F 0.3 ul
annealing 50度 1min ∣31 cycles primer R 0.3 ul
extention 72度 2'30s — dNTP 10mM 0.5 ul
extra extention 72度 3min 10X buffer 2.5 ul
10度 pause PFU 0.3 ul
ddH2O 20.6 ul
total 體積是25ul
我另外也有上網查資料
有看到turbo pfu polymerase 的溫度條件最低限制是50度
剛好我的annealing的溫度就是50度
請問pcr做不出來會是因為這個原因嗎?
還是是有其他一些我沒有注意到的地方呢?
請有經驗的人或是專家可以幫我解答嗎?
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.100.234
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