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[求救] western blot電泳時電流不穩定的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (懶..)時間17年前 (2008/12/24 19:26), 編輯推噓5(5推 0噓 14→)
留言19則, 6人參與, 7年前最新討論串1/1
我們跑電泳所設定的電壓是上膠50~60V.下膠100~120V 但是最近在跑電泳時發現電源供應器上的電流值顯示到60~100多的mA 同學有反應似乎是不正常的反應 GOOGLE一下發現~電流太大的話會造成蛋白產生"電解" 因為以前在跑都只有20~30mA的電流值 並且壓片的結果會糊糊的(以ECL呈色) 同學覺得是配膠的Tris buffer(pH=8.8)有問題 但重配了2次結果仍然是電流太高 Running buffer也已重新配置 想請問板上高手們.有沒有解決的方法喔 thx!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.127.19.140
推
12/24 21:33, , 1F
這應該是SDS-PAGE..你標題我還以為是WB transfer的時候..
12/24 21:33, 1F
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12/24 21:34, , 2F
你的power會不會設定有問題?一般60v不可能到60mA..
12/24 21:34, 2F
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12/24 21:35, , 3F
buffer都重配而且以前沒這問題的話 或許該看看power
12/24 21:35, 3F
推
12/24 21:39, , 4F
可以考慮定電流啊~我個人跑都是定電流跑~
12/24 21:39, 4F
推
12/24 22:08, , 5F
短路嗎?你用哪牌的跑膠器?你只跑一片嗎?背面那面沒膠的
12/24 22:08, 5F
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12/24 22:09, , 6F
底下電線是不是有浸到running buffer?有的話會短路喔!
12/24 22:09, 6F
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12/24 22:09, , 7F
背面的電線不要浸到buffer
12/24 22:09, 7F
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12/24 22:11, , 8F
壓片糊糊的...你底片有整個"用力"壓在membrane上嗎?
12/24 22:11, 8F
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12/24 22:11, , 9F
我之前就只有"蓋"上去 就糊糊的 XD
12/24 22:11, 9F
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12/26 00:24, , 10F
K大您好~我想請教您所謂的短路是跑膠台上的電線短路嗎?
12/26 00:24, 10F
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12/26 00:26, , 11F
b大您好~Power supply是GE的~兩台不同台跑的結果都這樣耶
12/26 00:26, 11F
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12/26 00:31, , 12F
L大~謝謝您的建議喔
12/26 00:31, 12F
推
12/26 21:08, , 13F
是阿是阿~~
12/26 21:08, 13F
推
12/27 01:00, , 14F
換一組跑膠的的機器試試看 但是配方材料還是先用原來的
12/27 01:00, 14F
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12/27 01:01, , 15F
或是去別家換個系統試試看 基本上定電流看起來沒問題
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12/27 01:03, , 16F
Tris 和Tris-HCL不一樣喔 Tris buffer的PH值要很注意
12/27 01:03, 16F
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12/28 10:20, , 17F
SORRY^^"是Tris-Hcl,但是我已經有把所有buffer pH重測囉
12/28 10:20, 17F
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11/11 01:12, , 18F
是阿是阿~~ https://daxiv.com
11/11 01:12, 18F
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01/03 16:49, 7年前 , 19F
buffer都重配而且 https://muxiv.com
01/03 16:49, 19F
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