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[求救] 請問用濕式transfer 看E-cadherin??

看板Biotech (生命科學)作者 (等待)時間17年前 (2009/01/15 00:58), 編輯推噓6(6推 0噓 6→)
留言12則, 6人參與, 7年前最新討論串1/1
之前實驗室都是用semi-dry的機器transfer 其中一個要看的protein是120kD的E-cadherin 但不知道是哪裡出問題 每次結果都不是很穩定 有的時候整個連control組都沒壓到protein 不然就是壓片結果是一整片霧霧的樣子 transfer完 我們lab都會染FcF先看一下trasfer的結果如何 可是很多時候90kD以上 幾乎都是霧霧的一片 semi-dry的條件是250mA, 2hr 每次要取下membrane的時候 SDS-PAGE其實都已經Q起來了 後來(其實也就是今天)跟別間實驗室借了濕式的機型 條件設定為200mA, 2hr transfer完，拆掉三明治的組合 membrane上只剩下依稀殘留的marker殘影 染了FcF membrane上一片空白 我很確定組裝順序沒有錯 membrane上也有一些marker的殘存屍體 方向應該是沒錯 請問是我的條件設定錯誤嗎? 已經卡在E-cadherin卡了很久了 想請問有經驗的版友 可以提供我一些建議嗎??? 拜託了 能不能畢業就看它了.... 先謝謝你們~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.129.77.129
推
01/15 03:02, , 1F
我們家wet transfer都用300 mV,80min~看140kDa的蛋白
01/15 03:02, 1F
→
01/15 03:02, , 2F
另外~semi-dry的用15V,30min(看大protein會到45min)
01/15 03:02, 2F
→
01/15 03:02, , 3F
看你要不要試試看
01/15 03:02, 3F
推
01/15 07:26, , 4F
一樓應該是300mA
01/15 07:26, 4F
推
01/15 09:57, , 5F
sorry打錯~感謝樓上指正~是300mA沒錯
01/15 09:57, 5F
推
01/15 18:49, , 6F
確定這個抗體work嗎?
01/15 18:49, 6F
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01/15 22:09, , 7F
抗體OK 不過效價是有點弱了....但還OK
01/15 22:09, 7F
推
01/16 23:35, , 8F
transfer buffer methanol的比例是用多少?
01/16 23:35, 8F
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01/18 22:09, , 9F
20%
01/18 22:09, 9F
推
01/19 21:24, , 10F
試試10%
01/19 21:24, 10F
→
11/11 01:14, , 11F
transfer bu https://daxiv.com
11/11 01:14, 11F
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01/03 16:50, 7年前 , 12F
一樓應該是300mA https://noxiv.com
01/03 16:50, 12F
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