[求救] 請問有人養過 colo 205 嗎 ?

看板Biotech (生命科學)作者gugin (陳抽筋)時間17年前 (2009/01/26 16:08)推噓3(3推 0噓 9→)

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因為最近開始接觸以細胞篩選藥物的實驗是個超級新手有幾個問題想請教大家 1. cell line : colo 205 , medium : RPMI + 5% FBS 我發現若在 T75 flask 內 passage 1*10^6 細胞，約在兩天後細胞的 morphology 會開始產生變化，細胞會從圓形開始出現 “ 長角” 的樣子，也會變的細長而非圓形 ; 另外一些細胞一樣呈現圓形，但體積變大，細胞膜完整，但整個細胞內　看起來都黑黑的，此外 passage 兩天後也會出現一些小亮點 (不知是否為 apoptotic body)，請問這些出現這些 morphology 改變的原因是什麼？是否是我的細胞已經太老 ? 又，用這樣條件下的細胞來進行藥物篩選所得到的得結果可信嗎 ? 2. 之前實驗是將T75 flask內的細胞取下，seeding 不同細胞數目在96-well plate 內，在24，72　和 96小時後測 cell viability ; 問題是 : 72 和 96小時的cell viability 相較於24小時，幾乎沒有增加 (有確認過細胞數目在合理範圍內) ；而後第三次實驗在 72 小時和 96 小時又可以明顯看出 cell viability大幅提升，但我實在想不出來是做了什麼改變造成兩次實驗結果大不相同，想到的　是第三次實驗時，細胞是 passage 後兩天取下，而先前是 passage 後三天才　取下，有可能是先前細胞養太老，導致在 seeding後，細胞已不在　log phase 　的狀態了嗎？ 3. 為了要確保 seeding 時細胞處在 log phase ，我想先以 T75 flask 培養細胞測得其生長曲線，而後在 log phase 時將細胞取下，seeding 不同細胞數目在96-well plate內，在24，72 和 96小時後測 cell viability，以求得最佳篩選藥物的細胞數目，不知道這樣的實驗設計是否可行 ? 有無邏輯上的瑕疵　？因為是新手, 問題有點多, 在此先謝謝大家耐心看完 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.167.185.120