[求救] western blot時,duplication亮度差很多
我一次跑四片膠,兩組sample,二重複。
第一次壓的p-ERK看起來,二重複的差異還不會很嚴重:
http://myhome.ethome.com.tw/liar2000/090206_p-ERK_M.jpg

壓完後會stripping,再看GAP-43
http://myhome.ethome.com.tw/liar2000/090206_GAP-43_M.jpg

從上面往下看膜,1,4相同,2,3相同,包括順序和量都一樣。
(不過有一兩個lanes因為sample不足而空在那。)
結果上面兩張的GAP-43亮度竟然幾乎沒了,明明所有的membrane都是一起操作的,
包括blockink,ab,wash,stripping,前一個p-ERK看起來還差不多,(甚至上面兩張
還亮一點)結現在上面兩張突然暗掉,下面的duplication卻暴亮?
請問這是什麼原因呢?我在blocking、一抗和wash時都有注意所有的膜沒有黏在一起。
何況我也沒聽過膜靠太近會有這種狀況,所以我想破頭都想不到好的解釋,請各位
前輩幫我抓一下問題好嗎?
另外就是我semi-dry transfer時,是先擺好所有的膜後,再從上到下的順序放gel的,
不曉得是不是喬位置喬太久讓後面已經擺上的膜乾掉,所以下面兩張扭曲的很嚴重....
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太初有道,道與耶和華同在,道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造,凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭,
這生命就是人的光。光照在黑暗裡,黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦誘惑,回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間,從被造之日至今,又自今直到那審判之日的來臨。
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