[求救] western blot時,duplication亮度差很多

看板Biotech (生命科學)作者 (墮天使)時間17年前 (2009/02/06 23:23), 編輯推噓0(000)
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我一次跑四片膠,兩組sample,二重複。 第一次壓的p-ERK看起來,二重複的差異還不會很嚴重: http://myhome.ethome.com.tw/liar2000/090206_p-ERK_M.jpg
壓完後會stripping,再看GAP-43 http://myhome.ethome.com.tw/liar2000/090206_GAP-43_M.jpg
從上面往下看膜,1,4相同,2,3相同,包括順序和量都一樣。 (不過有一兩個lanes因為sample不足而空在那。) 結果上面兩張的GAP-43亮度竟然幾乎沒了,明明所有的membrane都是一起操作的, 包括blockink,ab,wash,stripping,前一個p-ERK看起來還差不多,(甚至上面兩張 還亮一點)結現在上面兩張突然暗掉,下面的duplication卻暴亮? 請問這是什麼原因呢?我在blocking、一抗和wash時都有注意所有的膜沒有黏在一起。 何況我也沒聽過膜靠太近會有這種狀況,所以我想破頭都想不到好的解釋,請各位 前輩幫我抓一下問題好嗎? 另外就是我semi-dry transfer時,是先擺好所有的膜後,再從上到下的順序放gel的, 不曉得是不是喬位置喬太久讓後面已經擺上的膜乾掉,所以下面兩張扭曲的很嚴重.... -- 太初有道,道與耶和華同在,道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。 萬物乃藉祂所造,凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭, 這生命就是人的光。光照在黑暗裡,黑暗卻不接受光。 吾輩乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦誘惑,回歸黑暗。 我不斷地徘徊於光明與黑暗之間,從被造之日至今,又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.22.47
文章代碼(AID): #19Z5NdYs (Biotech)
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