[求救] SDS-PAGE鑄膠問題
大家好
最近在做SDS-PAGE的膠片時
running gel 的最兩邊在凝膠之後會出現氣泡
就是在最左邊和最右邊的well範圍會有那種不規則的氣泡 有點像變形蟲的觸手那樣
因為之前在做的時候都不會有這樣的情形
但最近卻常遇到
問過實驗室的學長姐大家不是沒有這種情形就是偶爾很久會一次
但也不知道原因為何?
目前我想得到的變因 就只有一個
就是最近多了兩個之前都沒有在跑SDS-PAGE的人來使用
但我也想不出會是個人習慣的哪個部分出了問題?
或者是我自己哪邊有和以前不一樣 是自己的疏失
所以想來請教各位前輩
過去有無類似的經驗?
該如何解決?
謝謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.74.19
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05/03 20:50, , 1F
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這個我確定沒問題耶
推
05/04 05:08, , 2F
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好像有喔...請問小觸手的作用是...?
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我想補充一下
因為這幾次有類似的情形發生
所以我在鑄膠的時候都有注意要把他混均勻
混的時候也只是輕輕的上下pipette一下 沒有讓氣泡產生在我配的溶液內
loading膠到玻璃的時候也有注意有無氣泡產生
用isopropanol壓平之後我還特別檢查確定沒有氣泡
但是在膠凝了之後卻有變形蟲形狀的氣泡產生 = =
真得是很詭異......
會不會是reagent哪裡有問題呢?
--
然後我還有另一個問題 = =
在我純化完之後
跑完SDS-PAGE
發現每個well都有一條約 60 kD 的band 而且竟然連空的well(只有loading dye)都有!!!
但我問過最近有跑的人 他們的膠片上都沒有
所以初步排除 dye 遭到汙染的可能
有時候那條 band 甚至會和其他well內的 band 手牽手
想請問大家會是什麼原因啊?
拜託了~感謝
※ 編輯: littlelizard 來自: 140.112.74.19 (05/04 11:59)
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05/04 13:02, , 3F
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05/05 11:40, , 9F
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原本我以為是因為我用15%膠的問題
我今天發現那個氣泡是在膠和玻璃之間 用力擠壓玻璃之後就可以把泡泡排掉
所以泡泡的問題暫時算是解決了
目前只剩下well內會有奇怪的band
初步判斷是background 因為15%膠比較退不乾淨 退太久目標片段就不見了...囧
但今天跑了純化濃縮後的發現 這東西確實存在我sample裡
還需要進一步釐清
大概是這樣
感謝各位寶貴的意見^^
※ 編輯: littlelizard 來自: 140.112.74.19 (05/05 19:34)
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05/06 16:19, , 10F
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05/06 16:20, , 11F
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是喔...那請問有解決方法嗎?
之前我使用的是29:1孔徑的acrylamide
最近實驗室買了37:1的
學姐有建議我換這個試試看
另外學姐也建議我可以try一下peptide gel
感覺要 Trouble shooting 還真不容易耶 = =
※ 編輯: littlelizard 來自: 61.224.24.196 (05/07 00:56)
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11/11 01:27, , 12F
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01/03 16:54,
7年前
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