[求救] 測量活性及濃度問題
上回我聽實驗室前輩的測量方法如下:
1.蛋白質濃度測定
試劑2ml+ 0.5ml sample最後得到OD值
前輩跟我說蛋白質濃度因為被稀釋到2.5ml(也就是從0.5稀釋2.5)
所以真實的濃度要除回來算出0.5ml真實濃度。我覺得這樣說法很合理
但另外一個人告訴我說:直接算2.5ml濃度就好，他認為假設濃度很低可
以忽略。不曉得我該採用哪套方法才正確，基本上我認為最前面的講法
算出真實濃度比較合邏輯
example
試劑+sample OD540 = 0.435 假設相對濃度320mg/L，因為被稀釋所以算回
"原始濃度320X5=1600mg/L"
這樣算法是對的嗎?
2.另外計算活性activity的問題，假設我拿一個試劑稀釋0.05g加入溶劑稀釋到30ml
接著取1ml加入9ml另外溶劑中，最後取0.9ml跟酵素0.1ml反應於2ml反應tube中
則試劑濃度最後達到0.15g/L。
接著計算 U (Activity) = micro mole/min
取0.1ml enzyme 要計算1ml單位分鐘內反應活性
所以 從OD換算出來的值假設 32micro-mole X 10(換算成1ml)/10mins = 32U
覺得邏輯上合理但想問這邊的專家這樣算法是否正確?
還是有瑕疵的地方需要補救
謝謝各位高人專家指導~~
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