[求救] 怎麼得知細胞有無表現我要的蛋白質?

看板Biotech (生命科學)作者 (認真過每一天)時間17年前 (2009/04/10 22:34), 編輯推噓4(403)
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我的實驗是要transfection一個plasmid,表現出我要的蛋白質 但是這個蛋白是會自己從細胞secret出來。 transfection的操作沒有問題,我的ctr:帶有螢光基因的plasmid 有正常的表現,可是我要怎麼知道我的蛋白也一樣成功的被細胞 表現? 抽RNA跑RT-PCR嗎? 或直接做western blot? 如果是做western blot,我需要lysis細胞淬取蛋白,還是直接從 medium中取得我的蛋白? 需要注意到的細節? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.231.194.88 ※ 編輯: lazyQ 來自: 61.231.194.88 (04/10 22:36)

04/10 23:22, , 1F
SECRETION FORM PROTEIN直接買kit收medium過column即可
04/10 23:22, 1F

04/10 23:22, , 2F
需要注意的細節:金錢
04/10 23:22, 2F

04/10 23:26, , 3F
樓上中肯= =
04/10 23:26, 3F

04/10 23:29, , 4F
序列有LL的leading sequence理論會跑出來
04/10 23:29, 4F

04/10 23:29, , 5F
但是我老師會要我收medium與cell lysate一起跑WB
04/10 23:29, 5F

04/11 00:20, , 6F
medium要濃縮或冷凍乾燥 不然產量太低可能會誤判
04/11 00:20, 6F

04/11 13:18, , 7F
用路西法assay作?
04/11 13:18, 7F
文章代碼(AID): #19trZyGc (Biotech)
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