[求救] yeast 的flow cytometry
看板Biotech (生命科學)作者btnsdolphin (Training and Sharpening)時間17年前 (2009/04/14 23:11)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串1/1
最近把yeast拿去上flow cytometry
但是光沒有藥物處理的control組就怪怪的
只有一個G1 peak
但正常的cell population 應該要有較小的G2/M peak吧
跑了兩次結果都一樣@@
至於藥物處理部份
我是用hydroxy urea (DNA-replication inhibitor)處理4hr.
去synchronize cell
之後換到無藥物的medium
並開始每隔20min收一次細胞
(time point=0~120 min.)
理論上無藥物時
yeast cell就會開始進入S phase
所以推測一開始主要是單顆細胞
之後會開始budding 再分裂
這樣的推論在顯微鏡下觀察的確如此
ex:80min時 觀察到啞鈴型的快進入分裂的兩顆細胞
看了好幾次都是在80min時幾乎都是這樣的形態
但是flow的結果卻是在100 和120 min時才出現小小的第二個peak
難道會是yeast的啞鈴型會被flow認定成兩顆細胞??
還是我有其他操作部分是需要改進的呢
我的操作主要是:
sodium citrate buf 50mM
cold EtOH (final 70%) 4度C O/N (邊加邊vortex)
RNaseA 0.1mg/ml 37 2hr
PI 4~8ug/ml 4度C O/N
過30um mesh後上機
(不過上機操作是core lab負責)
謝謝呀~~
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