PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] 如何將純化出來的蛋白去磷酸化?

看板Biotech (生命科學)作者 (阿矇)時間17年前 (2009/05/11 13:22), 編輯推噓5(5推 0噓 13→)
留言18則, 6人參與, 7年前最新討論串1/1
請問大家是如何將純化出來的蛋白去磷酸化的? 小弟現在有一個蛋白在轉譯過程後會被寄主細胞的系統磷酸化 現在我想要把磷酸根拿掉~ 依照我的想法: 1.加去磷酸脢 ex: CIAP 那我應該去找哪一家的CIAP? 因為聽說不同家的CIAP去磷酸根的能力不一樣? 那哪一家的產品最好呢?是否有有經驗的版大能夠提供意見的ˊˋ 我已經試了好幾次了..感覺磷酸根都拿不掉... 還是有其他方法呢? 但是前提是不要太暴力... 除理掉磷酸根的蛋白還要繼續拿來作反應.. 謝謝大家的幫助 orz -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.173.247
推
05/11 14:38, , 1F
考不考慮用isotope,這樣就不用硬要dephosphorylation?
05/11 14:38, 1F
推
05/11 15:57, , 2F
做mutation?
05/11 15:57, 2F
→
05/11 20:46, , 3F
我現在要做的實驗就是要比較蛋白去磷酸根前後的變化
05/11 20:46, 3F
→
05/11 20:47, , 4F
所以樓上兩位板大的方法可能不是很適合我.還是謝謝了!
05/11 20:47, 4F
推
05/11 21:10, , 5F
你的實驗有加入CIP的postive control？問題可能不在CIP有無
05/11 21:10, 5F
→
05/11 21:11, , 6F
作用,而是你採用的觀察方式無法適用在評估去磷酸化的效果
05/11 21:11, 6F
→
05/12 00:37, , 7F
我的實驗步驟之ㄧ是單純想要把我的蛋白的磷酸根拿掉
05/12 00:37, 7F
→
05/12 00:38, , 8F
我想知道的是 是否有方法去拿掉蛋白的磷酸根~
05/12 00:38, 8F
→
05/12 00:39, , 9F
就是將蛋白去磷酸根的實驗~在去掉後會以抓磷酸根的
05/12 00:39, 9F
→
05/12 00:39, , 10F
抗體去做偵測確定是否已將磷酸根去除~
05/12 00:39, 10F
→
05/12 00:40, , 11F
跪求各位前輩...是否有去掉磷酸根的好方法呢?
05/12 00:40, 11F
推
05/12 01:16, , 12F
如果是要看活性的話,mutation是可行的,Aln是仿沒有p的form,
05/12 01:16, 12F
→
05/12 01:18, , 13F
而Thr是仿有p的form.若非測活性,這個方式就沒用了
05/12 01:18, 13F
推
05/12 13:46, , 14F
lambda phosphatase (NEB)
05/12 13:46, 14F
→
05/13 14:24, , 15F
謝謝樓上兩位板大的意見!!我想我去找一下phosphatase
05/13 14:24, 15F
→
05/13 14:24, , 16F
來試試看好了!!感激 orz
05/13 14:24, 16F
※ 編輯: mournermind 來自: 140.113.173.247 (05/13 14:25)
→
11/11 01:28, , 17F
我的實驗步驟之ㄧ是單純 https://noxiv.com
11/11 01:28, 17F
→
01/03 16:55, 7年前 , 18F
就是將蛋白去磷酸根的實 https://noxiv.com
01/03 16:55, 18F
‣ 更多 mournermind 的文章
文章代碼(AID): #1A1xOle1 (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 mournermind 的文章
文章代碼(AID): #1A1xOle1 (Biotech)