[方法] 我想請問一些有關於ELISA (TNF-ALPHA)_的基本問題!!!!!!!
我是第一次做ELISA 附近沒人做對這實驗的樣貌不清楚,kit是之前實驗室的人留下的,
行蹤不明
所以我想問一些很基本的問題
我使用的是HUMAN TNF-a ELISA kit (pierce)
細胞是U937 懸浮型 加藥treatment後測 TNF-a
1.TNF-a 是應該要存在於細胞上清液中嗎??如果是,我應該用什麼離心條件取得上清液
300xg 5min ???
2.每一種sample要做2重覆,這2重覆應該是指同時準備2盤同樣的細胞加同樣濃度的藥
分別取1次上清液共(2個sample)??這樣說對嗎???還是同一細胞上清液取2次就好?
3.根據說明書,應該是它附的96well plate上有coat 某種東西抓得住sample的TNF a
再以biotinlated antibody抓TNF a 再以Streptavidin-HRP Reagent抓biotin最後以
TMB呈色
我這樣對這原理的理解有誤嗎???
4.大家在wash well之後,是怎麼把washing buffer 抽出來,直接倒掉再甩一甩嗎??
5.我怎麼知道實驗準不準確或成功???
6.如果plate用完了,但是buffer還有,plate通常有得賣嗎???因為我不熟悉這實驗
暫不考慮自己coating
謝謝大家,還請有做過的回我一下!!!!
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