[求救] Nickel 變褐色

看板Biotech (生命科學)作者 (唸著倒在正你)時間16年前 (2009/06/22 18:15), 編輯推噓5(503)
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今天在用 Ni-NTA column 做純化時 Buffer的DTT濃度太高 有5mM 結果原本藍色的nickel 整個還原變褐色的 現在整個resin都是褐色的 用EDTA沒用抓不下來都還是維持褐色 用水跟酒精也沒用 用弱氧化劑去洗也是一樣 誰能教我怎辦 實驗室之前沒這樣過 老師也出國 麻煩有經驗的高手能幫我解答一下 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.202.79

06/23 01:36, , 1F
查一下QUIAGEN或pharmacia的protocol 記得有提到
06/23 01:36, 1F

06/23 04:05, , 2F
請問開始純化之前,是否有用Ni+2溶液再生resin的動作?
06/23 04:05, 2F

06/23 07:35, , 3F
說明書建議不要加 DTT, 用 b-ME 最高加到 20 mM
06/23 07:35, 3F

06/23 07:36, , 4F
不過我用到 5 mM 還是會又淡淡的褐色就是了
06/23 07:36, 4F

06/23 07:38, , 5F
你用 DTT 那種 strong reducing agent, Ni 都被
06/23 07:38, 5F

06/23 07:39, , 6F
reduced 了,沒辦法 bind protein 的....
06/23 07:39, 6F

06/23 09:52, , 7F
用1M NaOH 之後再用水洗 試試看?
06/23 09:52, 7F

06/23 12:35, , 8F
用1M NaOH 洗可以洗掉了 感謝
06/23 12:35, 8F
文章代碼(AID): #1AFrcpMv (Biotech)
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