[求救] 做cell transfection時vector會插入chromosome嗎?

看板Biotech (生命科學)作者 (我是可憐蟲>_<...)時間16年前 (2009/06/23 19:55), 編輯推噓4(403)
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我目前在做cell transfection,並想挑出可以表現目標蛋白的stable clone. vector用的是pcDNA4/TO/myc-His,而cell則是用293T, transfect後有一直用抗生素zeocine來做篩選. 我想請問, 在做stable transfection時,外來的vector是否會插進host cell chromosome? 還是說,只會形成episome之類的結構,而不會插入chromosome呢? 我有先用wiki查了一下, http://en.wikipedia.org/wiki/Transfection405 上面說stable transfection時由於有用selection marker作篩選, 會讓外來基因integrate into host genome, 但我不懂這邊的"integrate into genome"是指會插入至chromosome? 還是說只是維持episome狀態,沒被踢掉而已? 麻煩請解答一下囉~ 感激!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.64.247.93

06/23 20:00, , 1F
插入吧? 因為表現量會有差 剛transfection完後的幾天
06/23 20:00, 1F

06/23 20:01, , 2F
protein表現量會明顯比stable高 (當然細胞株也有差)
06/23 20:01, 2F

06/24 09:10, , 3F
借標題問 我也想用293T做stable cell-line 但我查了一下
06/24 09:10, 3F

06/24 09:12, , 4F
293T 對G418不敏感 HEK293才敏感 借問要怎麼篩選?
06/24 09:12, 4F

06/26 02:11, , 5F
增加G418的濃度 還是可以篩
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293T的large T antigen是用G418 selection,再用一次G418
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06/26 07:02, , 7F
挑的話,應該只是拼運氣吧
06/26 07:02, 7F
文章代碼(AID): #1AGCAcJ3 (Biotech)
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