[閒聊] 可以交流一下灌流固定RAT的protocol嗎??

看板Biotech (生命科學)作者ddlittleq (捲頭悶)時間16年前 (2009/08/07 23:46)推噓0(0推 0噓 1→)

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最近小弟初碰IHC 可是做切片前的固定有點搞不定雖然是照著實驗室的protocol還是固定不太好以下是我們Lab的protocol: (所取組織:多是 CNS) 1.從左心間插入灌入冰saline 50~100 cc 流速近乎最大接著在右心房剪洞 (將老鼠體內的血沖出) 2.等saline流完後灌入4%福馬琳同老鼠體重的cc數(ex.Rat:200g formalin:200cc) 並且分成兩種流速一開始用近乎全速剩一半後再以約 1 drop/s 的方式固定 3.由於我們都有先做過前處理我不知道一些蛋白質的活性會不會因為福馬林太多或太濃就降低甚至消失我以前學過的方式是取下組織後浸泡福馬琳再視組織條件調整泡福馬琳時間可是我不知道這方法適不適用於處理過的老鼠我很怕等固定好要抗的東西就失活了ˊˋ 懇請各位前輩們可以提供小的一些意見或參考protocol亦或是相關學習管道只要各位前輩們肯敎小的很樂意多方面吸收學習的 P.S 我們家是用冷凍切片但我們家的protocol還是要做固定= =" (雖說是冷切但不是常見的一台有完整冷卻系統那種而是一般"非滾輪式的切片機"+"水冷系統" `囧rz ) 拜託各位前輩了!!> <" -- 如果能贏誰想輸... 如果能成功誰想失敗... 如果未來會更好誰還會停滯不前... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.170.2.77