[求救] B-actin的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (哈哈)時間16年前 (2009/08/17 23:55), 編輯推噓7(708)
留言15則, 9人參與, 7年前最新討論串1/1
發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 想要請問一下有沒有人做western blot 的membrane 壓完抗體之後,stripping 之後,再壓B-actin卻都壓不出來, 這是我最近幾次實驗發生的問題,因為之前我用一樣的stripping buffer, 都很OK,可是最近就很慘........ 今天把stripping的時間降為50度西20分鐘,TEST wash之後, 再用Ponceau S染一下,結果發現membrane上面已經沒有東西了, 所以明天的B-actin可想而知應該是沒有,所以上來請教一下個位前輩, 有沒有遇過這樣的經驗,可以給我建議,謝謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.173.140.92

08/18 00:03, , 1F
PVDF還是NC??
08/18 00:03, 1F

08/18 00:09, , 2F
PVDF
08/18 00:09, 2F

08/18 01:45, , 3F
stripping buf是哪家的?!我都用室溫搖10~15分就夠了
08/18 01:45, 3F

08/18 07:01, , 4F
我用invitrogen的話 室溫45分鐘即可
08/18 07:01, 4F

08/18 10:43, , 5F
肉眼看不到 不代表冷光訊號測不到
08/18 10:43, 5F

08/18 10:55, , 6F
Ponceau S的訊號其實很弱~還是要以ECL的為主才說得準
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08/18 14:44, , 7F
50℃會不會太高了?不然就反過來做,先壓你要看的如何?
08/18 14:44, 7F

08/18 14:45, , 8F
說錯,先壓 actin,再壓你要看的
08/18 14:45, 8F

08/18 22:58, , 9F
stripping buf是自己配的,另外今天有壓出來,所以....
08/18 22:58, 9F

08/18 22:59, , 10F
有時候實驗真的不知道該怎麼解釋.....
08/18 22:59, 10F

08/19 00:04, , 11F
牛奶新鮮嗎
08/19 00:04, 11F

08/19 10:01, , 12F
eaton 很冏喔~
08/19 10:01, 12F

08/23 08:45, , 13F
我也是室溫15分鐘 五十度有點太高了吧..
08/23 08:45, 13F

11/11 01:41, , 14F
stripping b https://muxiv.com
11/11 01:41, 14F

01/03 17:00, 7年前 , 15F
50℃會不會太高了?不 https://daxiv.com
01/03 17:00, 15F
文章代碼(AID): #1AYNrvRW (Biotech)
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