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[求救] 抽大量plasmid，isopropanol沈澱後看不到pellet

看板Biotech (生命科學)作者 (情人去死)時間16年前 (2009/09/11 18:57), 編輯推噓6(6推 0噓 7→)
留言13則, 8人參與, 7年前最新討論串1/1
我用的是qiagent endofree maxi kit 搖200ml的菌量，離心後，把全部的菌量用10ml 的p1混合成一管，完成依照他的protocol 但是最後，用isopropanol沈澱後，一直都看不到pellet 第一次測出來，濃度才9ng/ul，根本是沒有抽到 做了兩次，都是這樣的結果Q.Q 請問該怎樣確認到底是中間哪步驟出了問題? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.40.60
推
09/11 19:03, , 1F
同樣的plasmid 抽miniprep大概有多少量?
09/11 19:03, 1F
推
09/11 19:10, , 2F
用2YT養看看 check copy number 增加p1的量
09/11 19:10, 2F
推
09/11 21:14, , 3F
抽大量的話 打破細菌那步很重要 確定有打到變豆漿嗎?
09/11 21:14, 3F
推
09/11 22:10, , 4F
抽大量的話~~~還是用傳統法吧!!
09/11 22:10, 4F
推
09/11 22:30, , 5F
菌太多P1沒均勻打散後面的P2無法完全溶解..
09/11 22:30, 5F
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09/12 08:15, , 6F
mini大概可以抽到5ug/50ul，我猜是不是加isopropanol後，就
09/12 08:15, 6F
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09/12 08:15, , 7F
接離心，沒有在室溫下等個十分鐘，這有關西嗎？
09/12 08:15, 7F
推
09/12 09:43, , 8F
所以protocol上寫加了isopropanol後直接離心嗎？
09/12 09:43, 8F
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09/12 16:51, , 9F
沒寫，沒有特別註明
09/12 16:51, 9F
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09/29 22:02, , 10F
這邊的原因，後來我發現，P2下去後，藍藍的部份呈現局部一顆
09/29 22:02, 10F
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09/29 22:03, , 11F
顆的，後來我加P2後，會一直搖一直搖，到非常均勻為止
09/29 22:03, 11F
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11/11 01:44, , 12F
顆的，後來我加P2後， https://noxiv.com
11/11 01:44, 12F
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01/03 17:01, 7年前 , 13F
接離心，沒有在室溫下等 http://yofuk.com
01/03 17:01, 13F
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