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[求救] A549 cell的trnasfection

看板Biotech (生命科學)作者時間16年前 (2009/09/12 14:20), 編輯推噓4(4推 0噓 4→)
留言8則, 6人參與, 最新討論串1/1
我是用invitrogen的lipofectamine 2000 在6cm dish中做transfection 條件: A549 cell confluency>90% lipofectamine reagent 20ul pCMV-HA tag-insert cDNA 約10.4kb 送入8ug (8ul, 260/280=1.87) DMEM+DNA 8ul ->RT 5min -----> mix RT 20min 慢慢滴入細胞 DMEM+reagent 20ul ->RT 5min 在sreum- and P/S-free 的DMEM中進行transfection 5hr 及 24hr之後換成含serum的medium 換medium後的14hr harvest cell 做western blotting detect HA-tag 都沒有detect到東西= = 有沒有板友可以給些建議 萬分感謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.76.175.170
推
09/12 14:29, , 1F
>90%不會太多嘛？ 是沒用過lipofectamine，不過14hrs不會
09/12 14:29, 1F
→
09/12 14:29, , 2F
太短嘛？另外A549本身轉染效率就不大好。
09/12 14:29, 2F
→
09/12 14:37, , 3F
guideline的建議是90~95% 我也有想過14hr是不是太短
09/12 14:37, 3F
→
09/12 14:39, , 4F
但如果有送進去的話 有CMV應該14hr就足夠表現我要的東西
09/12 14:39, 4F
推
09/12 14:44, , 5F
用3T3當positive cell看看送不送得進去
09/12 14:44, 5F
推
09/12 15:01, , 6F
A549的transfection efficiency不太好喔...
09/12 15:01, 6F
推
09/13 08:45, , 7F
A549真的不好transfection,反而黴漿菌污染後效率變好~囧
09/13 08:45, 7F
→
09/15 17:35, , 8F
use OptiMEM?
09/15 17:35, 8F
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