[討論] phosphoprotein的western blotting

看板Biotech (生命科學)作者 (pingagaga)時間16年前 (2009/09/15 16:48), 編輯推噓3(304)
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之前在做phosphoprotein的western 就有比較了用BSA跟Milk的差別 用BSA的那一組 用的濃度都是1%BSA in TBST 而用Milk的那一組 blocking是用5% milk 1抗是用o.1%BSA in TBST 2抗則用2.5%Milk 壓片出來的結果 是BSA那一組比較好 而用MILK的那一組 protein卻幾乎沒有 很白(壓了20min) 之前都是聽說用milk是會造成high background 可是我的卻是很乾淨 壓不到幾個band 在這裡想請問大家~~ milk除了會造成high background之外 是否會將phosphoprotein degrade呢? 這一點我找了很久都不知道該怎嚜解釋.....請大家幫幫忙囉~甘溫^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 202.144.214.74

09/15 18:47, , 1F
不會~我壓ERK那些也是用MILK~但聽說有沒有加PHOSPHATASE
09/15 18:47, 1F

09/15 18:47, , 2F
INHIBITOR有差~但我也都沒加@"@
09/15 18:47, 2F

09/16 13:56, , 3F
Milk內富含highly phosphorylated的乳鐵蛋白, 所以你用
09/16 13:56, 3F

09/16 13:57, , 4F
milk等於蓋了一層充滿phosphorylation signal上去, 會有
09/16 13:57, 4F

09/16 13:58, , 5F
你的蛋白被degraded的感覺
09/16 13:58, 5F

09/25 04:38, , 6F
我們實驗室的western只要看phosphorylation就一定不用牛
09/25 04:38, 6F

09/25 04:39, , 7F
奶來block 並且一定會加phosphotase inhibitor
09/25 04:39, 7F
文章代碼(AID): #1AhrJTs6 (Biotech)
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