[方法] 請教做protein concentrate的問題 …

看板Biotech (生命科學)作者 (airsoda)時間16年前 (2009/09/21 21:29), 編輯推噓6(6015)
留言21則, 11人參與, 7年前最新討論串1/1
請問有人用過Millipore的microcon做過蛋白質濃縮嗎? 類似Amicon的半透膜產品 我用的是50kDa的 老師想要把protein extraction裡面大於50kDa的蛋白質去掉 但是我用了之後...發現雖然離心後液體有下去 跑PAGE後發現蛋白質都留在上面 完全沒有下去 請問問題出在哪? 目前傾向protein extraction太濃(3.8 g/l) 我的做法是 用RIPA抽蛋白質 取400放在50kDa的microcon上面的column 14000rpm,10分鐘,4度C離心 理論上上層液為大於50kDa的蛋白質 下層液為小於50kDa的蛋白質 但是結果下層什麼東西都沒有 -- O .o o ○ O . .° ° o. o. └═╬ ┌╥┼ ╬═┐ ╬═┘ ╔═╗ ║ └═╬ ο ╔═╣ ║ ╬╦╝ ╚═╗ ║ ║ ╔═╬ ╔═╣ o ┼═╬ └╨┘ └╚┘ ┼═╝ ┼═╝ ┼═╝ ┼═╬ ° o.° 。. o。 ○ 。 O .o .o ..○. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.171.195.147 ※ 編輯: airsoda 來自: 118.171.195.147 (09/21 21:29) ※ 編輯: airsoda 來自: 118.171.195.147 (09/21 21:30)

09/21 21:51, , 1F
嗯 我也有類似的問題 小於孔徑的全留在上面
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09/21 22:17, , 2F
如果備兩支(50&3.5)用洗的收集下來然後再濃縮呢...
09/21 22:17, 2F

09/22 00:58, , 3F
蛋白質有結構就不會下去,把PH值調到2 or 11是個方法
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09/22 13:00, , 4F
這問題我遇過 我的心得結論是蛋白質太濃,要大量稀釋操作
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09/22 13:00, , 5F
至於要多少濃度... 這要try一下
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09/22 13:01, , 6F
另外,轉速 不能太高.....
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09/22 13:58, , 7F
protein可能是monomer or oligomer,所以看分子量不一
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09/22 13:58, , 8F
定準確!
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推樓上 另外膜孔很容易被塞住 所以小的不見得過的去
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而且這產品設計用來"濃縮" 不保證可依分子量分開蛋白質@@
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09/22 16:26, , 11F
請問轉速大概降到多少 10000rpm可以嗎?
09/22 16:26, 11F

09/22 23:16, , 12F
我參加過他們半的workshop 這是因為被大分子的塞住
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孔洞 大分子在離心時沉降比較快 很容易塞住 個人經驗
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09/22 23:20, , 14F
是小分子的還是過的去 可是超少 做膠體過濾吧
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09/26 01:38, , 15F
降低轉數 提高時間 我記得說明書上建議的轉數/時間和你的
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差很多…不同轉速適合分離不同大小的片段 不是什麼東西都
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適用高轉速的
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濃度太高也可能是問題 孔洞一下就會卡住
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09/29 01:11, , 19F
用RIPA的話,你的lysate可能會太黏而無法穿過膜...
09/29 01:11, 19F

11/11 01:45, , 20F
另外,轉速 不能太高. https://noxiv.com
11/11 01:45, 20F

01/03 17:01, 7年前 , 21F
適用高轉速的 https://daxiv.com
01/03 17:01, 21F
文章代碼(AID): #1Ajt-jWb (Biotech)
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