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[求救] 我的PCR有問題＝ ＝

看板Biotech (生命科學)作者 (阿焦)時間16年前 (2009/10/02 15:25), 編輯推噓6(6推 0噓 10→)
留言16則, 8人參與, 7年前最新討論串1/1
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 恩...是這樣的 我在放大一段大約3kb的DNA片段 PCR的條件是95度C---5mins 95度C---45sec 58度C---45sec 72度C---1mins 72度C---7mins 可是放大的結果 卻多一條大小大約400bp的band被我放大出來(從gel上很清楚看到） 想說可能是污染到其他東西 我把buffer等等全部換掉 再跑都是多一條band 後來想想,是primer有問題嗎 可是偏偏negative control(沒有加template但其他都有加)完全沒有band 所以想問問大家 有可能在哪裡發生問題？？？？ 還是說 可以忽略那多出來的一條band,繼續做下去勒？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.154.12
推
10/02 15:27, , 1F
miss primering?? 定序看看阿~~~
10/02 15:27, 1F
推
10/02 15:28, , 2F
non-specific binding?如果只是要cloning的話就切膠純化
10/02 15:28, 2F
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10/02 15:28, , 3F
吧，接完再定序。
10/02 15:28, 3F
推
10/02 15:36, , 4F
72度要不要久一點啊? 通常1K一分鐘
10/02 15:36, 4F
推
10/02 15:57, , 5F
同二樓 另外72度時間看polymerase 例如fusion-tag
10/02 15:57, 5F
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10/02 15:58, , 6F
在palsmid上15秒就1kb
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10/03 00:03, , 7F
都忘了說是從plasmid上放大
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10/03 00:04, , 8F
polymerase是Ex-Tag polymerase
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10/03 00:04, , 9F
那如果我把膠切下來再做一次pcr勒
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推
10/03 01:00, , 10F
你要不要看看你Taq一分鐘做幾bp啊??
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10/03 01:00, , 11F
切下來再跑 很容易糊掉喔
10/03 01:00, 11F
推
10/08 15:27, , 12F
我倒是覺得還好耶XD" 跟2樓想法一樣~
10/08 15:27, 12F
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10/08 15:28, , 13F
如果真的這樣就算cleanup後再P一次還會有那一條band
10/08 15:28, 13F
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10/08 15:29, , 14F
因為我有經驗一一;;
10/08 15:29, 14F
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11/11 01:46, , 15F
在palsmid上15 https://noxiv.com
11/11 01:46, 15F
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01/03 17:01, 7年前 , 16F
在palsmid上15 https://daxiv.com
01/03 17:01, 16F
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