[討論] 請教蛋白質denature的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (JUNE)時間16年前 (2009/11/01 20:12), 編輯推噓2(205)
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請問大家 為何跑SDS PAGE時 要把protein denature呢 不了解將雙硫鍵打斷的目的是什麼?? 然後 protein sample buffer 中的還原劑 用 DTT 配製是否有該注意的保存問題呢? 我知道 DTT 的還原力很強 然而他本身卻也不太穩定 冷凍在 -20 冰箱幾個月後卻變色了 (從藍色變成黃色) 査了一些資料是說 DTT 在 PH7 時才發揮作用 那我的 sample buffer 是否也不能用了呢? 因為不想一直重配 想釐清其中的疑點 還請有經驗的前輩指教 謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.240.87.178

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打斷雙硫鍵讓分子變小
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得先破壞蛋白質的三四級結構,否則在膠體內游動的速率會受到
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影響
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我也覺得是把結構破壞,讓所有的蛋白質在相同狀態起跑
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SDS要完整包覆才可以代表這蛋白的大小-帶電量關係
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另外DTT應該是透明的吧?(結凍是白色) 你的藍變黃
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是加在sample buffer裡面了? 不嫌麻煩可以要用時再加
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文章代碼(AID): #1AxNia6O (Biotech)
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