[求救] 請問有人做過p35這個蛋白質嗎
目前我實驗使用的是 PC 12 嗜鉻細胞瘤細胞株
目的是要研究 p35 以及它被 calpain 裂解後的 p25
由於我最後真正要拿來進行實驗的是以 NGF 使其分化的成熟神經細胞
因為老闆想看蛋白質表現量，所以打算以 Western blot 來進行
擔心最後 lysis 細胞後的蛋白質萃取液太稀
所以選擇讓它在 10 cm dish 裡分化，讓它長多一點
但是不知道為啥養在 10 cm dish 裡面又長得不如養在 6 well dish
養在 6-well dish 裡又不容易用塑膠棒刮下來
因為總覺得 dish 好小不容易刮，殘留的細胞應該不少
1. 請問我是否可以使用 trypsin 把成熟分化後的 PC12 打下來
接著離心，然後就加入lysis buffer？
2. 請問有人以 Western blot 壓過 p35 以及 calpain 嗎？之前使用 Santa Cruz 的
p35 polyclonal rabbit IgG 發現多重 band 的現象很嚴重，大概會出現 4 條
後來改成使用 cell signaling 的 p335 monoclonal rabbit IgG 結果反而變成什
麼都壓不出來 = =|||
a. 這種多重 band 的情形是不是 p35 被裂解的緣故所造成的？有沒有版友推薦壓
這個蛋白質的抗體 Orz
b. calpain 據說分成 large 以及 small，有版友壓過任何一個嗎？目前我都壓出
空白片 囧....
先感謝版友賜教囉 ~
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