[求救] triton X-100 solubility assay
想請問有人作過這個實驗嗎??
目前在這個實驗trouble shooting很久....T^T
那這個實驗主要目的是去決定adherens junction component
(ex:E-cad,beta-catenin...)的detergen-solubility properties.
作法:
1. cell溶在CSK-A buffer
(0.5% triton,25mM Tris-HCl,25mM NaF,10mM sodium pyrophosphate,
2mM sodium orthovanadate)+protease inhibitor
2. 放4度西搖20 min
3. 離心 14000g 10 min,4度西
4. 分sup : 加sample buffer
pellet : 溶2*sample buffer(加到與sup同體積)
5. 等量loading,跑western
以上protocol有問題嗎...歡迎有作過的人提出討論~
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