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[求救] 黏合兩段互補DNA的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (puly)時間16年前 (2009/12/24 17:18), 編輯推噓4(4推 0噓 3→)
留言7則, 5人參與, 最新討論串1/1
廠商建議我配置緩衝液溶解DNA 配方如下 10mM Tris, pH 7.5-8.0, 50mM NaCl, 1mM EDTA 溶解後在95℃加熱2分鐘，隨後慢慢冷卻至室溫 請問有經驗的人通常作法是如何? 是先加去離子水配置好後再拿去滅菌或直接用0.22μm膜過濾? 在95℃加熱2分鐘就可以了嗎？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.104.12
推
12/24 17:41, , 1F
1.滅菌 2.PCR機器允許的話可以設慢慢自動降溫
12/24 17:41, 1F
→
12/24 17:42, , 2F
95降到室溫大概設40分吧
12/24 17:42, 2F
推
12/25 03:08, , 3F
I use ligation buffer instead, it's easier
12/25 03:08, 3F
推
12/25 14:46, , 4F
所以加熱2分鐘 是要滅菌嗎?
12/25 14:46, 4F
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12/26 10:50, , 5F
謝謝你的解答
12/26 10:50, 5F
推
12/30 16:05, , 6F
用水浴槽加熱至95度，關掉後慢慢冷卻至室溫，PCR太奢侈了
12/30 16:05, 6F
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12/30 16:06, , 7F
DNA用的溶液一定要高溫高壓，目的是去除DNase
12/30 16:06, 7F
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