PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] TA clone

看板Biotech (生命科學)作者 (琳琳)時間16年前 (2009/12/29 03:50), 編輯推噓2(2推 0噓 12→)
留言14則, 5人參與, 最新討論串1/1
PCR取得insert並加上primer上設計的切位以後(bamh I)(兩邊都是) 做了TA clone，pcr screen也有東西，但是一直切酵素切不下來，只切了一刀 定序後發現少了一個bamhI切位 之後重做TA順利切下，pcr screen也有預期產物 可是後來跑PCR又跑不出東西 1.為什麼切位會消失~"~ 2.後來PCR怎麼都跑不出來 (是在做ligation時，拿TA產物去做positive control都沒有東西) 但是原來質體拿去做Positive就有預期產物 ※ 編輯: lynn42595 來自: 220.130.42.235 (12/29 05:05)
推
12/29 14:51, , 1F
TA cloning上原本有BamHI的切位嗎？
12/29 14:51, 1F
推
12/29 17:54, , 2F
primer是for哪裡的？vector上還是insert上？
12/29 17:54, 2F
→
12/29 17:55, , 3F
如果是vector，我覺得不是很好P耶，如果template是TA產物的
12/29 17:55, 3F
→
12/29 17:57, , 4F
話，當然也是有機會P成功的。
12/29 17:57, 4F
→
12/29 17:59, , 5F
問一下，原來質體是指？？
12/29 17:59, 5F
→
12/29 18:00, , 6F
至於切位阿～你的每一顆都切不下來嗎？有時後會發生突變現象
12/29 18:00, 6F
→
12/29 18:00, , 7F
可能會有一兩顆切不下來
12/29 18:00, 7F
→
12/29 21:10, , 8F
TA 一般用EcoRI切吧 分生這東西 想原因通常無3小錄用
12/29 21:10, 8F
→
12/29 21:12, , 9F
重做吧 或是說你跟分生磁場不合 手氣被 那去拜拜吧!
12/29 21:12, 9F
→
12/29 21:30, , 10F
ta clone上面本身沒有bamhI切位。primer是for insert
12/29 21:30, 10F
→
12/29 21:31, , 11F
insert本來在p3x flag上面，就有P下來
12/29 21:31, 11F
→
12/29 21:32, , 12F
但是ta產物就P不出來，線在已經在重做了...重做好幾次
12/29 21:32, 12F
→
12/29 21:33, , 13F
每次遇到問題都不一樣
12/29 21:33, 13F
→
01/02 16:25, , 14F
primers及 切位 仔細算一下
01/02 16:25, 14F
‣ 更多 lynn42595 的文章
文章代碼(AID): #1BEGl-Dy (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 lynn42595 的文章
文章代碼(AID): #1BEGl-Dy (Biotech)