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[求救] transform的E.coli長很慢

看板Biotech (生命科學)作者 (money)時間16年前 (2010/01/09 18:51), 編輯推噓6(6推 0噓 10→)
留言16則, 7人參與, 最新討論串1/1
最近準備要做lentivirus plasmid的vector是從中研院買的pLKO_As2和pLKO_As3w 裡面帶有一段自己cDNA 當transform到DH5a後,plate上的colony長得很慢(跟pLNCX比的話) 而且大小好像不一 之後換成LB養也是長很慢(要放快24小時) 請問這兩個vector本來就會這樣,還是有其他的因素? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.174.232
推
01/09 21:34, , 1F
1.建議用TB養 2.DH5a可能會使vector產生重組
01/09 21:34, 1F
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01/09 21:34, , 2F
建議使用Stbl3.
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01/09 21:54, , 3F
他有建議用TB 不過我的菌倒是長很兇 我改回LB
01/09 21:54, 3F
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01/09 22:18, , 4F
那TOP10呢? 而且pLNCX之前養都ok,會是pLNCX較不會重組嗎?
01/09 22:18, 4F
推
01/09 22:20, , 5F
我也覺得sinica這組vector都很low~low~low~~copy
01/09 22:20, 5F
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01/09 22:52, , 6F
我查到ori是pUC,那不是嗨copy的嗎?
01/09 22:52, 6F
推
01/10 00:41, , 7F
pLKO這套系統,最好TB養30℃,24 hr後挑small colony
01/10 00:41, 7F
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01/10 00:41, , 8F
比較可以挑到正確的colony~
01/10 00:41, 8F
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01/10 00:42, , 9F
寧可長慢點~然後挑到正確的~比較好~根據經驗~長快的挑得
01/10 00:42, 9F
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01/10 00:43, , 10F
正確率低~會挑到哭出來~
01/10 00:43, 10F
推
01/10 10:08, , 11F
推薦 凍菌 取一點劃plate再挑 保證正確
01/10 10:08, 11F
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01/11 22:51, , 12F
不好意思, 有人用過invitrogen pLenti4-V5-dest嗎?
01/11 22:51, 12F
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01/11 22:52, , 13F
有人用DH5a養的嗎? 還是一定得用stbl3 ?
01/11 22:52, 13F
推
01/12 16:11, , 14F
一定要用stb13,他那plasmid有設計過,用一般E. coli會亂切
01/12 16:11, 14F
推
01/12 19:15, , 15F
大驚!!! 只好去尋找stbl3了ˊ,ˋ 謝謝樓上大大!
01/12 19:15, 15F
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01/15 19:37, , 16F
謝謝以上大大
01/15 19:37, 16F
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