[方法] 限制酵素切不乾淨

看板Biotech (生命科學)作者 (民國的福爾摩斯)時間16年前 (2010/02/22 20:37), 編輯推噓2(202)
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我的sample是human tissue 的genomic DNA 用kit抽出DNA後還有用phenol和chloroform 再一次純化 確保histone被清除 接著取1000ng 用MspI 5Units 切在CC/GG的位置 總反應體積20ul 作用時間4小時 37度 digest後也加熱去活性了 但是問題就在於 我將切完的DNA拿去跑PCR還是有夾到band 雖然很微弱 而我的amplicon包含了一個MspI切位 想請教各位 是我的digestion步驟還有哪裡不夠完善嗎? 或是有過類似情況的版友可以分享一下 真的感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.61.1

02/22 21:15, , 1F
為你有說PCR結果微弱~應該是你的DNA品質不好!可能有phenol
02/22 21:15, 1F

02/22 21:16, , 2F
或chloroform殘留!!!
02/22 21:16, 2F

02/22 21:32, , 3F
恩....但是我也經過確實洗鹽處理了 應該也有可能
02/22 21:32, 3F

02/22 22:22, , 4F
切割時間延長試試看吧 有的酵素要比較久的時間
02/22 22:22, 4F
文章代碼(AID): #1BWdfqoc (Biotech)
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