[問題] <100bp的 sequencing

看板Biotech (生命科學)作者 (什麼都在漲)時間16年前 (2010/06/02 16:49), 編輯推噓4(403)
留言7則, 4人參與, 最新討論串1/1
最近老闆想說要sequencing一些小片段的 PCR product (60-80bp) PCR這些小片段sequence 經過幾次測試之後 都跑得出來 電泳也確實看得到東西 但是送去明欣定序後 說片段太短沒辦法做 他們重定了幾次 都沒辦法讀到 他們建議要>200bp 才有辦法定序 不過老闆看的paper 上頭寫說 QPCR product 可以下去direct sequencing 看起來就是可以讀得到的@@ 請問各位大大有啥方法可以讀出這麼小片段的sequence嗎? 目前我是打算把這些PCR product接到plasmid裡面 再讓他們從plasmid上整個下去讀sequence 不過老闆真的很急很急 想問問各位大大有啥其他方法可以更快得到答案 謝謝各位。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.93.172

06/02 18:44, , 1F
小片段很好接上,而且方便以後你要繼續ampify他
06/02 18:44, 1F

06/02 18:44, , 2F
以後需要只要抽maxi,再切就好,不用在PCR了
06/02 18:44, 2F

06/02 20:09, , 3F
TA cloning下去作吧 你PCR出來的東西也不一定純
06/02 20:09, 3F

06/02 20:12, , 4F
早上PCR+ligation+塗盤 晚上挑菌 隔天早上作mini
06/02 20:12, 4F

06/03 07:54, , 5F
PCR product(純化後)->ligation->Transformation塗plate
06/03 07:54, 5F

06/03 07:55, , 6F
隔天長菌用同一組primer作coloy PCR-->定序
06/03 07:55, 6F

06/07 02:23, , 7F
20bp是primer 40bp是反應不良區 定序還沒開始就結束了...
06/07 02:23, 7F
文章代碼(AID): #1C1XidfJ (Biotech)
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