[求救] 貼附型細胞繼代後要多久才能處理?

看板Biotech (生命科學)作者 (小皮)時間15年前 (2010/07/12 00:17), 編輯推噓2(205)
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最近在做病毒及藥物處理細胞的實驗 細胞株是Vero及Huh7 流程大致上是這樣: 以Trypsin-EDTA作繼代,不離心,直接加入含FBS的medium作中和 種一定數量的細胞,等隔天貼附後就作病毒感染或是藥物處理 但結果都不太理想 像是Huh7以藥物處理作positive control也沒有想要的表現情形 甚至未處理的對照組似乎表現的比有處理的還多 是因為細胞剛貼附沒多久尚未穩定就立刻做實驗的關係嗎? 如果是的話,那繼代完多久再處理會比較好? 以Vero作病毒的定量,測定結果似乎也遠低於實際的濃度 老闆是說可能是Trypsin影響到細胞膜,造成病毒較難感染 所以叫我用PBS-EDTA作繼代就好 目前正在重養一批新的Vero,打算只用EDTA繼代 不過凍起來前也是以Trypsin處理的,不知會不會一樣 請各位前輩們幫幫我吧 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 125.232.184.130

07/12 01:21, , 1F
你們的FBS有沒有做補體去活性的動作!?且建議去trypsin
07/12 01:21, 1F

07/12 01:22, , 2F
另外~病毒感染時建議先wash後~再加入含virus的sup
07/12 01:22, 2F

07/12 01:24, , 3F
純的病毒液處理至少1hr(依病毒不同而有異)後回補medium
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07/12 01:25, , 4F
且建議回補後FBS濃度是原先的1/2~因為FBS會阻礙病毒感染
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07/12 01:26, , 5F
所以病毒處理後才以1/2 FBS濃度,讓新生成的病毒重複感染
07/12 01:26, 5F

07/12 13:15, , 6F
謝謝
07/12 13:15, 6F

07/12 14:32, , 7F
請教一下~你們是使用什麼病毒?!不同的病毒有不同感染法
07/12 14:32, 7F
文章代碼(AID): #1CEUwXVq (Biotech)
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