[求救] 貼附型細胞繼代後要多久才能處理?
最近在做病毒及藥物處理細胞的實驗
細胞株是Vero及Huh7
流程大致上是這樣:
以Trypsin-EDTA作繼代,不離心,直接加入含FBS的medium作中和
種一定數量的細胞,等隔天貼附後就作病毒感染或是藥物處理
但結果都不太理想
像是Huh7以藥物處理作positive control也沒有想要的表現情形
甚至未處理的對照組似乎表現的比有處理的還多
是因為細胞剛貼附沒多久尚未穩定就立刻做實驗的關係嗎?
如果是的話,那繼代完多久再處理會比較好?
以Vero作病毒的定量,測定結果似乎也遠低於實際的濃度
老闆是說可能是Trypsin影響到細胞膜,造成病毒較難感染
所以叫我用PBS-EDTA作繼代就好
目前正在重養一批新的Vero,打算只用EDTA繼代
不過凍起來前也是以Trypsin處理的,不知會不會一樣
請各位前輩們幫幫我吧
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