[解惑]關於transient 和 stable transfection的差別

看板Biotech (生命科學)作者 (elmo軒)時間15年前 (2010/07/12 19:26), 編輯推噓4(406)
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最近在討論transfection的問題 我手上的vector是pCMV-SPORT6 好像只能做transient 因為我之前都是做細菌 最近開始著少要做細胞 所以這部分去看書查資料 這兩者的差別主要是在stable transfection的基因能夠嵌入染色體中 分裂時也會影響到子代 是永久的 幾個問題 要如何知道我的載體是stable 還是 transient 是不是看載體上面的基因呢? 在查資料的過程中我看到了有所謂reporter gene 以及selective gene 我大致了解這兩個基因的功能 但哪一個是決定他是stable還是transient的關鍵呢? 還是都不是? 而我手上的pCMV-SPORT6 我確定他沒有細胞可以做篩選的gene 但是reporter gene這部分我不清楚 請大家可以幫我解惑一下嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.124.250.117

07/12 20:48, , 1F
沒selection marker 那就不能篩
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07/12 21:45, , 2F
所以不能篩就是只能做transient transfection是嗎?
07/12 21:45, 2F

07/12 22:17, , 3F
可以,必須co-transfect帶有selection marker的plasmid
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07/13 14:40, , 4F
自己放selective gene阿。co-transfect有風險。
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07/13 16:31, , 5F
之所以會變stable是因為外源基因隨機插入chromosome
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07/13 16:32, , 6F
你要做的事情是 用抗生素把這些有插入外源基因的細胞篩選出
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07/13 16:33, , 7F
reporter gene應該是做promoter assay會用到的
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07/13 16:35, , 8F
要嘛自己加一段IRES+抗抗生素基因到vector上
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07/13 16:35, , 9F
不然就再把你的基因P出來或切出來接到有抗抗生素的vector
07/13 16:35, 9F

07/13 19:50, , 10F
喔喔 我想我懂了 謝謝大家
07/13 19:50, 10F
文章代碼(AID): #1CEllj3z (Biotech)
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