[求救] 請問western 結果產生反白之band該如何改進?

看板Biotech (生命科學)作者 (Goodday)時間15年前 (2010/07/21 15:32), 編輯推噓10(1007)
留言17則, 13人參與, 最新討論串1/1
發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 最近我蒐集幾批樣品請人幫我跑 western 結果跑出來一些雜band很明顯 反而預期位置的band變成反白 而且反白的趨勢還符合我預期的趨勢 (有兩批樣品有同樣情形) 也就是原本預期越強的band反白越大坨 據說2 抗加太強也可能會導致這樣 想請問高手們 我遇到這樣的情形是不是真的是訊號太強所導致? 如果是怎麼改進比較適合? 感謝不吝賜教 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.14

07/21 15:48, , 1F
來張圖看看 通常是sample太多
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07/21 15:57, , 2F
訊號太強+1
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07/21 16:04, , 3F
訊號太強!1、2抗都縮短時間
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07/21 17:39, , 4F
1.抗體濃度可以下少一點 2.壓片的時間縮短
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07/21 21:11, , 5F
減少樣品量,2抗濃度為正解,縮短壓片時間沒有用...
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07/21 21:50, , 6F
不想再做一次,直接用較弱的ECL也可以.
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07/22 07:38, , 7F
還想問說反白的原理是什麼? 算是類似曝光嗎? 感謝~
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07/22 09:19, , 8F
個人猜測應該是enzyme濃度遠超過substrate造成反應不能
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07/22 10:49, , 9F
是不是membrane燒掉了? membrane上面有沒有黃色的band出現?
07/22 10:49, 9F

07/22 13:00, , 10F
反白原理應該就是底片過度曝光吧 那麼造成曝光過度原因是
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07/22 13:00, , 11F
啥 就是樓上各位大大講的那些原因都可能
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訊號太強+1, 1抗.2抗.ECL.sample濃都都減少,壓短一點時間試
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我用CCD照的也有反白現象 似乎不是底片的原因
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07/22 21:17, , 14F
反白是訊號太強 ECL消耗光了 反而沒訊號. 所以底片CCD都空白
07/22 21:17, 14F

07/22 21:20, , 15F
樓上正解
07/22 21:20, 15F

07/23 00:12, , 16F
訊號太強!
07/23 00:12, 16F

07/28 04:13, , 17F
燒掉了 看你antibody的濃度要再稀釋還是降sample量
07/28 04:13, 17F
文章代碼(AID): #1CHgA3mM (Biotech)
文章代碼(AID): #1CHgA3mM (Biotech)