[求救] 求救 EAhy926細胞養不好..

看板Biotech (生命科學)作者tomoyo09 (撿栗子的愛情)時間15年前 (2010/07/22 16:42)推噓2(2推 0噓 3→)

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這個月中向別的實驗室要了人類內皮transformed 細胞株 EAhy926 cells 拿來的時候是培養的人先養在75T flask 隔天換medium (對方說必須要換) medium是自己買的、自己加添加物 medium的營養條件都是根據對方給的去配 (Hyclone DMEM liquid,含high glucose, L-glutamine，另外添加ECGS + HAT + 15% FBS + 1% P/S) (他們是用powder配DMEM，但因為有點狀況，緊急之下先訂commercial的medium) subculture兩天後細胞幾乎全滿 (8~10分滿) 然後1:3分成三盤 (10cm dish) 0.025% trypsin-EDTA 37度 2mins,離心 1200rpm 3 mins 細胞就都離下來了 flask也加了一些medium讓殘留的少量細胞可以繼續長兩天後細胞大概八九分滿做第二次subculture 把其中比較滿的兩盤平均凍成兩管有預留大概一盤三成的細胞量繼續用10cm dish culture 0.025% trypsin-EDTA 37度 2~3mins,離心 1200~1300rpm 4~5 mins (對方是說他都trypsin 2 mins, 離心1200rpm, 5mins) 但是細胞就漸漸長的不好了對方有告訴我這個細胞很好長.. 一盤滿大概300~400萬 (75T flask) 大概分80~100萬都長很快，兩三天滿 50萬就可以長了，只是長比較慢，大概要長一周但是我星期一凍細胞那天subculture之後，到今天細胞都還沒有五、六分滿分盤的隔天看細胞的形狀看起來也不太好反而flask只是固定換medium，雖然長得慢，但是細胞的型態都很正常，也看得出來有在慢慢長 medium 10cm dish跟75T flask都是用一樣的PBS跟medium 所以應該不會是這個問題我有去問當初給細胞的人他也想不出來為什麼不過他們家都是75T flask養這株細胞，要做實驗那一次才分出來用dish養，因此之後就不會再續養，也不清楚是否會是因為dish的影響請問細胞會因為養在flask或dish不同就長得比較不好嗎？如果有會是因為coating的差異嗎？還是其他緣故呢？可以請大家給點意見或建議嗎？我真的找不出原因>"< 謝謝!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.137.175.252