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[問題] 想問一下5'RACE意義為何?

看板Biotech (生命科學)作者 (中頭)時間15年前 (2010/07/29 18:02), 編輯推噓2(2推 0噓 7→)
留言9則, 6人參與, 最新討論串1/1
現在只是讀書 只懂學理不太懂實驗 所以想問一下 5'RACE的意義為何呢? 以一段incomplete cDNA為primer 對mRNA進行反轉錄補足5'端 可是這樣3'端不也是殘缺嗎@.@?? 示意圖 mRNA 5'────────── 3' 3'── 5' incomplete cDNA ↓ 5'────────── 3' 3'──────── 5' " ? " 跑完之後 前面那段呢??? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.223.234.107
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07/29 18:59, , 1F
再跑3'RACE定序就好啦~
07/29 18:59, 1F
抱歉再問一下 我用的是weaver的molecular biology 裡面只有提到5'RACE 想問一下如果用3'RACE是怎樣呢?? 從網路上查似乎是用含有poly(T)的adapter去跑反轉錄 既然如此為何最後5'又不要了呢? @.@ 我是看這裡的 http://www.tcmon.com/Article/UploadFiles_0702/200811/20081105145344588.jpg
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07/29 20:17, , 2F
把5'RACE產物跟3'RACE產物混合再PCR就得到cDNA全長了
07/29 20:17, 2F
可以混合!? 意思是說用3端和5端夾出來是嗎? 那想問一下做3'RACE的時候不是已經反轉錄整個target mRNA了嗎? 為何接下的步驟只要3端而已? ※ 編輯: mediumturtle 來自: 61.223.234.107 (07/29 20:28)
推
07/29 21:17, , 3F
exact transcription start site
07/29 21:17, 3F
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07/29 22:22, , 4F
那如何獲得cDNA全長呢?
07/29 22:22, 4F
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07/29 23:06, , 5F
以前的技術沒辦法區分3'RACE有沒有全部做完吧 會缺5'
07/29 23:06, 5F
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07/29 23:07, , 6F
5'RACE會缺3'的部份 兩個產物互補起來就有全長了呀
07/29 23:07, 6F
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07/29 23:37, , 7F
好我知道了...thanks
07/29 23:37, 7F
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08/03 22:21, , 8F
因為RT時用dT的關係, 常常是缺5'端啊, 3'比較不會缺
08/03 22:21, 8F
推
08/03 23:47, , 9F
主要目的不是就在找TIS~有沒有3'端要看就實驗需要摟
08/03 23:47, 9F
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