[求救] 請問RT 之後測量cDNA 之量準嗎?

看板Biotech (生命科學)作者 (Goodday)時間15年前 (2010/08/25 21:02), 編輯推噓5(503)
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發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 我進行一批樣品的RT-PCR 時 會先測量RNA 之量 再取定量RNA 去跑RT 可是RT之後 去跑GAPDH 之PCR 時 常常顯示各樣品cDNA 量並不一致 於是要調整老半天以求各樣品GAPDH 之PCR 產物一樣亮 想請問的是 如果跑完RT所得之cDNA 之溶液 以photometer (測定特定吸光值) 去測單股DNA 之量來判斷cDNA 之量準嗎? 或是有沒有辦法在跑PCR 之前先確認各樣品cDNA之量一致? 先感謝指教~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.14

08/25 22:38, , 1F
RT-PCR不就只能當"相對"定量嘛!?得做均一化才行啊
08/25 22:38, 1F

08/26 01:59, , 2F
有做cDNA沉澱 把RNA和dNTP去除嗎? 沒有的話測不準
08/26 01:59, 2F

08/26 16:33, , 3F
老問題囉 cDNA吸光測不準因為裡面有很多dNTP
08/26 16:33, 3F

08/27 12:20, , 4F
只能在RNA定量及RT過程盡量改善手法,減少後續調整麻煩
08/27 12:20, 4F

08/28 00:07, , 5F
只能盡量減少pipette error...
08/28 00:07, 5F

08/30 15:49, , 6F
訄搯ㄓFpipette error之外,還有哪些要注意的呢?
08/30 15:49, 6F

08/30 15:50, , 7F
我每次都很小心,可是每次轉出來GAPDH多少都會差一點> <
08/30 15:50, 7F

08/31 03:21, , 8F
除了RNA外, 其他東西都配成一管再分裝, 確保差異最小
08/31 03:21, 8F
文章代碼(AID): #1CTHHZaK (Biotech)
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