[求救] 想請問random primer 跑PCR的條件 ~(>< 急)

看板Biotech (生命科學)作者 (小老鼠)時間15年前 (2010/09/11 00:10), 編輯推噓3(305)
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我有一個未知的病毒 想知道他的DNA序列 老闆希望我用random primer 去做PCR 所以我訂了兩條 分別是NNNNNNA NNNNNNG 但是我不知道PCR的條件該怎麼設 因為他的Tm值是負的 @@ paper 上的條件幾乎都是RT 我就用了一般的條件試試看 做了兩組: 兩條primer 都加 , 只加一條primer 條件是 50度西 35個cycle 但是都沒東西~完全沒有條帶 不知道有沒有人用random primer 做過PCR 可以給我點建議? 謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.141.46.65

09/11 00:31, , 1F
先把病毒DNA打斷做成Library,再做sequencing會不會比較快?
09/11 00:31, 1F

09/11 03:34, , 2F
之前做6base randam primer PCR設在40~45之間,usually 42
09/11 03:34, 2F

09/11 03:37, , 3F
但那是for RAPD,病毒不大的話不如直接定序...
09/11 03:37, 3F

09/11 10:06, , 4F
直接定序要怎麼定? 是直接把整管DNA送定序公司嗎?
09/11 10:06, 4F

09/11 10:27, , 5F
我查過一般好像是用限制酵素切之後接TA再去定序
09/11 10:27, 5F

09/11 10:28, , 6F
但老闆堅持要random primer.........
09/11 10:28, 6F

09/12 03:33, , 7F
限制酵素或PCR處理 clone起來再做primer walking定序
09/12 03:33, 7F

09/13 11:47, , 8F
直接用gradient PCR找溫度會不會比較快~
09/13 11:47, 8F
文章代碼(AID): #1CYbYHup (Biotech)
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