[求救] 請問有關5'-UTR的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (World Peace)時間15年前 (2010/09/19 14:56), 編輯推噓3(307)
留言10則, 5人參與, 最新討論串1/1
大家好 我現在想要測試某蛋白質與另一基因的 mRNA 5'-UTR 之間是否有interaction 我的想法是,先設計一對primers,從細胞DNA中將5'-UTR對應的cDNA釣出來, 再用 in vitro transcription 把她轉成 RNA,之後再將此RNA產物與純化蛋白 incubate之後,進行 gel shift assay. 不知以上流程有沒有什麼問題? 如果這方法可行,我現在遇到了兩個問題: a. 要怎麼找到一個基因他5'-UTR對應的 DNA seq? 我在NCBI上弄了老半天還是只能得到一整條 chromosome.... b. 我查到了此基因的 mRNA 序列 (NM_....) 在CDS之前的那段是否就是5'UTR? 抱歉,因為不是做這方面的,問的問題有點笨拙請見諒! 也希望有強者能幫幫我~ 謝謝! -- 天使 在你 背後那樣模糊 天使 為你 你沒責任動情 天使 是我 你或未曾在乎 天使 是我 背負昨日罪名 能夠為你守護 置自己於不顧 全意為你守護 那是我天賦 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.60.46

09/19 20:21, , 1F
我想到的是IP該protein在PCR 類似ChIP
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09/19 20:21, , 2F
中間少一個RT
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09/19 21:37, , 3F
全長已知? 不用跑RACE?
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09/20 18:20, , 4F
到ensembl上找這個gene,會標示出UTR區域
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09/22 00:02, , 5F
謝謝樓上三位!!
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09/22 00:02, , 6F
I大的意思是指誰的全長已知?
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10/03 18:15, , 7F
推一樓。 CDS 前的就是 5'UTR。 如果你的蛋白是靠結構與 RNA
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10/03 18:16, , 8F
結合,那你目前的方法可能會有問題:非自然 folding、其他區
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域是否會影響 5'UTR 處的 folding等等。
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但沒做之前都不知道。加油!
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文章代碼(AID): #1CbRGK_d (Biotech)
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