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[求救] 要怎麼在plasmid上接 flag?

看板Biotech (生命科學)作者 (無聊正比於深度)時間15年前 (2010/09/22 17:07), 編輯推噓8(8推 0噓 12→)
留言20則, 4人參與, 最新討論串1/1
查過很多資料 都沒有寫得很詳細 不知道有沒有版友能夠提供?? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.138.43.203
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09/22 17:09, , 1F
quick change
09/22 17:09, 1F
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09/22 17:10, , 2F
或是合flag的DNA序列，在vector上切一刀或兩刀 把flag接
09/22 17:10, 2F
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09/22 17:10, , 3F
進去
09/22 17:10, 3F
推
09/22 20:42, , 4F
簡單作法就是買一個有flag tag vector
09/22 20:42, 4F
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09/22 20:44, , 5F
sorry..看錯 是要在plasmid上接flag 那上面比較對~
09/22 20:44, 5F
推
09/23 09:48, , 6F
合成flag的兩股 annealing起來 最好設計成兩邊有你
09/23 09:48, 6F
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09/23 09:49, , 7F
要塞的re site 省去還要用re處理合好的flag
09/23 09:49, 7F
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09/23 09:50, , 8F
enzyme site挑選可以的話用接上去後切不開的
09/23 09:50, 8F
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09/23 09:51, , 9F
例如BamHI->BglII 因為flag太短無法用跑膠挑clone
09/23 09:51, 9F
推
09/23 12:45, , 10F
要挑clone 當然可以，colony PCR就可以了....
09/23 12:45, 10F
推
09/23 13:10, , 11F
colony pcr是用flag本身當primer?
09/23 13:10, 11F
推
09/23 13:37, , 12F
用vector本身的primer...比如說沒接到的增值出來會是150 bp
09/23 13:37, 12F
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09/23 13:38, , 13F
有接到的增殖出來會是180 bp....多出來的就是flag的長度
09/23 13:38, 13F
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09/23 13:38, , 14F
不過我忘了flag多長了 30是我隨便說的數字
09/23 13:38, 14F
推
09/23 14:51, , 15F
30bp要用acrylamide比較明顯吧? 一般1% agarose gel
09/23 14:51, 15F
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09/23 14:52, , 16F
30哪看得出來..
09/23 14:52, 16F
推
09/23 17:29, , 17F
用那段合成的FLAG DNA為primer做PCR 若有正確產物表示有進去
09/23 17:29, 17F
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09/23 17:31, , 18F
就是其中一隻primer認vector上序列 另一隻認FLAG 做PCR
09/23 17:31, 18F
推
09/23 22:46, , 19F
怎可能用1%? 當然是至少2%!
09/23 22:46, 19F
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09/23 22:46, , 20F
樓上方法也是可以~
09/23 22:46, 20F
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