[求救] 請問有人是否做過蝕骨細胞分化??
各位不好意思，最近我在進行蝕骨細胞(OC)分化實驗時
遇到了許多瓶頸，希望有曾經做過的人能給予一些建議
第一個是收取prostate cancer(PC3) 的 condition medium(CM)
處理RAW cell進行分化--
目前參考許多paper以及老師以前的方法
是種 2x10^6 於10cm dish，隔天換1% medium培養48 hr
收取之上清液即為CM，而處理之方法為混合含有10%FBS新鮮medium
將CM稀釋為10%處理細胞，2~3天換一次，總共分化6天
而已經使用過RANKL當positive，確定RAW cell能分化成OC
但是CM處理之後完全無法分化成OC。
第二個實驗是取大鼠骨髓中之monocyte進行分化
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而方法也是參考以前實驗室的protocol
將大鼠犧牲後，取出腿骨，接著使用10% medium將骨髓中細胞沖出
靜置一天後，取出上清液中未貼附的細胞
接著數2x10^6種到24well中，添加50ng/ml RANKL及10ng/ml MCSF-7到10%FBS之培養基
2~3天更換一次並且添加RANKL及MCSF-7
但是我分化出來的都是fibroblast，沒有OC
目前不知道是哪邊出了問題，沒辦法repeat以前的分化實驗
希望有做過類似實驗的人
能分享一些經驗，感激不盡^^
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以方便板友幫您追蹤問題
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